GelRed and Gelgreen 核酸凝膠染料

zui靈敏 , zui穩定的核酸凝膠染色試劑，是真正的EB替代產品！

部分產品報價

由美國BIOTIUM公司技術專家研發的GelRed 和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩定于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過美國環保局安全認定，廢棄物可直接倒入下水道，而不會造成任何環境污染。(下載美國Litron Laboratories, Inc. 完整安全檢測報告）

目前大多數商業化的核酸染料（凝膠染色試劑）總是在安全性、穩定性和靈敏性等方面不*令人滿意。例如，雖然 EB (溴化乙啶）作為目前使用zui廣泛的核酸凝膠染色試劑，能夠在多數應用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學物質。而且EB染色后具有較高的背景熒光信號（如圖1）。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為zui靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預制凝膠中會快速降解，穩定性差導致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認為是市場上較為安全的核酸染料 ，但它的染色效果還遠不及 SYBR Green I 。

至于國內有公司宣稱的新產品Goldview，我們不想多加評論。因為從極為相似的對比試驗結果來看，該產品似乎就是AO（丫啶橙 ，一種劇毒產品，且熒光亮度不佳）。請看Goldview 與 AO 對比試驗結果（其中Goldview是從國內某公司采購，AO則來自SIGMA，報告來自開放生物）

特性:

 高靈敏度 
GelRed 和 GelGreen 是目前市場中zui靈敏的凝膠核酸染料
 穩定性* 
可以使用微波爐加熱，可以在室溫下保存
 更安全  
艾姆斯氏試驗結果表明，該染料的誘變性遠小于 溴化乙錠 （ EB ） 
 廣泛的適應性  
適用于預制凝膠和凝膠電泳后染色 
 染色過程簡單  
與 EB 一樣，在預制膠和電泳過程中不必擔心染料降解；而電泳后染色過程也只需 30 分鐘且無需脫色或沖洗   
 對 DNA 和 RNA 的遷移影響極小  
對核酸遷移的影響小于 SYBR Green I 
 與標準凝膠成像系統以及可見光激發的凝膠觀察裝置*兼容  
使用 312nm 激發的 UV 凝膠成像系統時， GelRed 可以*的替代 EB ；使用 254nm 激發的 UV 凝膠成像系統或可見光激發的凝膠觀察裝置時， GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料（見圖 4 中的光譜圖）

Biotium公司的GelRed 和 GelGreen 無論用于預制凝膠染色還是凝膠電泳后染色，都表現出了*的靈敏度。為配合 312 nm UV 凝膠成像系統而設計的 GelRed ，在使用了我們新開發的具有的試驗步驟后（該試驗步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統的 TBE 緩沖溶液），在凝膠電泳后染色中優于或者至少相當于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同， GelRed 在預制凝膠中使用時仍然有*的靈敏度，事實上GelRed 在檢測低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現出更高的靈敏度，尤其對小分子量的 DNA 檢測非常靈敏（圖1）。 GelGreen 可以滿足使用 488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見光激發的 Dark Reader 的研究人員的使用要求。 GelGreen 無論是在預制凝膠還是凝膠電泳后染色中都與 SYBR Green I 靈敏度相當，但不存在后者的不穩定性問題。實際上， GelRed 和 GelGreen ，特別是 GelRed 非常穩定，可以長期在室溫下保存。當這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規方法制備預制凝膠。含有染料的預制凝膠可以成批制備，長期保存。

同樣重要的是， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 獨立的測試服務公司（ Litron Laboratories, Inc. ）進行的標準艾姆斯氏測試結果表明， 在 18.5 μ g /mL （該濃度遠高于推薦用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）濃度下， GelGreen 沒有誘變性，而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學結構使其難以穿透細胞膜進入細胞，正是這一特性降低了染料的細胞毒性。如圖3。相反， SYBR Green I 廣泛地用于活細胞線粒體和核 DNA 染色，這正是由于它能快速的被細胞吞入。由于已知 SYBR Green I 對紫外線導致的突變有強烈的增強作用（ Ohta et al. Mutat. Res.  492 , 91(2001) ），因此它的高細胞膜透性使它在紫外環境觀察時成為凝膠染色的主要有害物質。
 

GelRed使用方法：

1：膠染法（用法同EB）

1）制膠時加入GelRed核酸染料（例如：每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000 × 儲液，以此比例類推）。

2）按照常規方法進行電泳。

注意事項：此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊50mL的膠。由于GelRed具有良好的熱穩定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。含有染料的預制凝膠溶液可以大量制備，并長期保存直到使用。

此方法不適合預制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

2．泡染法

1）按照常規方法進行電泳。

2）用H2O將GelRed 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如將15μL GelRed 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。

3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

注意事項：用泡染法染色時，染料用量較多。單次使用的染色液可重復使用3次左右。3× GelRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。

如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時間以保證邊緣清晰；改進上樣技巧或選擇泡染法染色。

特別提醒：如果您使用的是紫外成像儀，請選擇GelRed；如果您使用激光成像儀或希望在可見光下

觀測，請選擇GelGreen在極少數情況下，質粒經某些酶切后的DNA樣品會出現拖尾和分辨率降低，

此時建議同時嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適。

鄭重聲明：

凡是市場上聲稱具有與Gelred和Gelgreen相同特性的 EB 替代品，且不指明是 Biotium 公司品牌的核酸染料，經檢驗都是通過Gelred或 Gelgreen稀釋后重新包裝的水貨，染色質量遠不及Biotium原包裝產品。我們鄙視這種損害客戶利益的行為，并堅決打擊，發現一次我們將不再向其供貨！ 在此，我們呼吁用戶在購買Biotium公司產品時， 請選擇開放生物--Biotium中國總代理（OPE）或者上海起發實驗試劑有限公司購買 。

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